Mariana Di Girolamo se inició en el mundo de la interpretación en Santiago de Chile, su ciudad natal, en la Pontificia Universidad Católica, en una optativa mientras estudiaba Medicina. Finalmente se decantó por la actuación, que estudió durante cuatro años en el mismo centro. Durante el último curso estuvo trabajando en la serie Pituca sin Lucas.
Su primer papel protagonista en televisión lo obtuvo en 2017 en la serie Perdona nuestros pecados —por la que obtuvo el Premio Cophiue de Oro— creada por Pablo Illanes; a la que le siguió Río oscuro, creada por Víctor Carrasco. En 2020 protagonizó La Jauría, de Amazon Prime Video.
En relación al cine, comenzó con la película experimental Constitución, de Leonardo Medel —con quien más adelante trabajaría en La Verónica, grabada casi por completo en primer plano y por la que fue premiada en el Festival de Mujeres de Egipto en 2021— . En 2019 protagonizó como Ema, dirigida por Pablo Larraín, que se ha presentado en festivales como el de Sundance, San Sebastián o Venecia y por la que ha recibido el Premio Sant Jordi a la Mejor Actriz Extranjera.
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